Análisis de PCR

Tema: IMPLEMENTACIÓN DE UNA PCR-MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS EN LOS GENES HNF1-a y HNF4-a

Objetivo: Diseñar una PCR-Multiplex-DGGE, para determinar mutaciones en los genes HNF1-a y HNF4a.

Muestra: de sangre total mediante el Kit Wizard Genomic DNA purification

Tipo de Ácido Nucleico: DNA genómico

EXTRACCIÓN:

Lisis: Kit Wizard Genomic DNA purification

Separación: Kit Wizard Genomic DNA purification

Purificación: Kit Wizard Genomic DNA purification

Gen a amplificar: HNF-4alfa y HNF1a, que se encuentran en el GenBank

Tipo de PCR: PCR-Multiplex

 Desnaturalización:                               94°C                   30 segundos

 Hibridación:                                         61°C                   30 segundos

 Extensión:                                             72°C                   30 segundos                    

 Extensión Final                                      72°C                    7 minutos
 38 CICLOS 

Visualización: EFO

http://www.archivos.ujat.mx/dip/Nueva%20carpeta/sem%20divul/2007/dacs.pdf

Prueba de tamizaje y una confirmatoria

¿CUÁL ES LA MEJOR PRUEBA PARA EL TAMIZAJE DE DM?

La glucemia en ayunas es la prueba más sencilla para el tamizaje oportunístico de DM en personas asintomáticas que por algún motivo acuden a un servicio de salud. Sin embargo, la prueba de oro para el tamizaje de diabetes en estudios poblacionales sigue siendo la medición de la glucemia 2 horas post carga de glucosa. Es muy importante tener en cuenta que una prueba de tamizaje solo indica una alta probabilidad de tener DM y debe ser confirmada con una prueba diagnóstica.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS:

ü Hemoglobina Glicosilada HbA1C: Estado de la glicemia del paciente de hace 3 meses.

ü Método ELISA

http://apuntesmedicos.net/2008/05/27/diagnostico-de-la-diabetes-mellitus-y-otros-problemas-metabolicos-asociados-a-regulacion-alterada-de-la-glucosa/

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-21252006000100012&script=sci_arttext

Alteraciones de la Traducción

El gen que codifica para la insulina se encuentra en el brazo corto del cromosoma 11, el DNA aporta con las instrucciones para la síntesis de insulina, sucede en el núcleo; las alteraciones en la síntesis de la preproinsulina son algunas causas de diabetes mellitus. La alteración en traducción se relaciona con un trasportador de la glucosa el: GLUT4. La acumulación de AG intracelulares altera la señalización a través de IRS/PI3K con reducción de la translocación de GLUT4 a la membrana. Los AGL pueden incrementar la fosforilación de IRS, con el deterioro de la transducción de la señal de la insulina.

http://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=4788212

http://www.bago.com/BagoArg/Biblio/clmedweb523.htm

Alteraciones en la transcripción

MODY se presenta antes de los 25 años de edad y han demostrado una deficiencia en función de las células β del páncreas. Mutaciones en los 8 genes: MODY1: factor de transcripción el factor nuclear hepático- 4α (HNF-4α), MODY2: glucocinasa pancreática, MODY3: factor de transcripción HNF-1α., MODY4: factor promotor de la insulina-1 factor de transcripción del homeodominio (IPF-1), MODY5: factor de transcripción HNF-1β, MODY6: factor de transcripción NeuroD1 bHLH, MODY7: l factor Krupple-como 11 (KLF11) la proteína es un factor de transcripción de cinc, MODY8: el gen de la lipasa carboxilo-éster (CEL) que participa en el metabolismo de los lípidos. 

http://themedicalbiochemistrypage.org/es/diabetes-sp.php

Alteraciones Epigenómicas

La genética ha contribuido en el desarrollo  etiológico de la Diabetes mellitus,  enfermedad cursa en forma silenciosa y la aparición de autoanticuerpos dirigidos contra epítopes específicos del islote β pancreático;  los factores genéticos de predisposición se reconocen como el evento primario, seguido del factor gatillador del proceso inmunológico que se hace evidente con la presentación de marcadores de autoinmunidad. Los genes de la región HLA, y en especial los genes HLA clase de clase II (DQA1, DQB1 y DRB1) son los principales factores de susceptibilidad genética frente a la enfermedad.

http://soched.cl/Revista%20Soched/1_2013/1-2013.pdf#page=17