Terapia Génica

En la Terapia Genica exvivo, se ha utilizado el transplantar islotes para mejorar la supervivencia y reducir la respuesta inmunitaria, que consiste en la transferencia de genes antiapoptoticos, proangiogenicos, o inmunomoduladores mediante la utilizaciones de vectores virales o no virales (AAV y LV). Tambien en la terapia in vivo se centra en la transferencia de genes exogenos (Pdx-1, Ngn-3, MafA, IGF-1) a un tipo celular determinado del organimos y lo que se busca es: bloquear la respuesta inmune, regenerar la masa de celulas beta en el pancreas (terapia curatica), prevencion y tratamiento de las complicaciones secundarias (terapia paliativa). Todas estas tecnicas son aún experimentales y su aplicacion en clinica parece lejana.

 

http://www.elsevier.es/es-revista-avances-diabetologia-326-articulo-aproximaciones-terapia-genica-diabetes-tipo-90000359 

Terapia con Stem Cells

Investigadores han visto la posibilidad de que las células madre embrionarias humanas podrían desarrollarse como una terapia para el tratamiento de la diabetes, estudios recientes en ratones muestran que las células madre embrionarias pueden ser inducidas a diferenciarse en células β productoras de insulina; las células madre  deben ser capaces de diferenciar in vivo para producir el tipo deseado de célula. Para la terapia de diabetes, no está claro si será deseable producir únicamente las células de los islotes beta que fabrican insulina, sino otros tipos de células de los islotes pancreáticos que son también necesarios.

http://stemcells.nih.gov/info/scireport/pages/chapter7.aspx

http://link.springer.com/article/10.1007/s001250051636

Transgénico

Con desarrollo de la ingeniera genética se consigue la síntesis de la insulina mediante técnicas biotecnológicas, el procedimiento llevado a cabo fue muy ingenioso, utilizando las bacterias Escherichia coli como factorías en miniatura para producir de forma separada las cadenas A y B de la insulina humana, introduciendo para ello los genes  que las codifican en las bacterias mediante un vector (pBR322). Posteriormente se llevaba a cabo la purificación, plegamiento y unión in vitro de las cadenas, mediante la oxidación de las cisteínas para formar los puentes disulfuro de la proteína activa.

http://naukas.com/2012/01/05/exitos-transgenicos-la-insulina/

Recombinación de ácidos nucléicos y ADN recombinante

RECOMBINACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

Células beta (B): células parte del sistema inmunitario, realizan una recombinación genética: cambio de clase de inmunoglobulinas. Es un mecanismo biológico que cambia un anticuerpo de una clase a otra, por ej: de un isotipo llamado IgM a otro llamado IgG.

ADN RECOMBINANTE

Producción de insulina: se puede realizar varios experimentos que benefician a los pacientes que padecen de diabetes, producción de insulina a partir de una bacteria intestinal llamada E. coli. Al utilizar la técnica de ADN recombinante en esta bacteria hace que esta mismo sea como como "ganado" productor de insulina. El único problema que existe es la incompatibilidad de ciertos pacientes a esta insulina.

http://www.news-medical.net/health/What-is-Recombinant-DNA-(Spanish).aspx

http://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-genetica

Técnica de Southern blot

Desarrollado para detección de genes específicos en  ADN celular, el ADN es digerido por enzimas de restricción, fragmentos separados mediante electroforesis; la tinción: bromuro de etidio, los fragmentos de ADN de doble cadena son hidrolizados con ácido débil, desnaturalizados: NaOH.  El ADN es transferido: filtro de nitrocelulosa, se incuba durante un tiempo con la sonda marcada. Visualización: exposición a una película de rayos X (sondas radiactivas) o película sensible a la luz (sondas con fluorocromo).

http://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=dd48aeb8-9e38-4541-bcfb-d75fd6b2ee9f

Análisis de PCR

Tema: IMPLEMENTACIÓN DE UNA PCR-MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS EN LOS GENES HNF1-a y HNF4-a

Objetivo: Diseñar una PCR-Multiplex-DGGE, para determinar mutaciones en los genes HNF1-a y HNF4a.

Muestra: de sangre total mediante el Kit Wizard Genomic DNA purification

Tipo de Ácido Nucleico: DNA genómico

EXTRACCIÓN:

Lisis: Kit Wizard Genomic DNA purification

Separación: Kit Wizard Genomic DNA purification

Purificación: Kit Wizard Genomic DNA purification

Gen a amplificar: HNF-4alfa y HNF1a, que se encuentran en el GenBank

Tipo de PCR: PCR-Multiplex

 Desnaturalización:                               94°C                   30 segundos

 Hibridación:                                         61°C                   30 segundos

 Extensión:                                             72°C                   30 segundos                    

 Extensión Final                                      72°C                    7 minutos
 38 CICLOS 

Visualización: EFO

http://www.archivos.ujat.mx/dip/Nueva%20carpeta/sem%20divul/2007/dacs.pdf

Prueba de tamizaje y una confirmatoria

¿CUÁL ES LA MEJOR PRUEBA PARA EL TAMIZAJE DE DM?

La glucemia en ayunas es la prueba más sencilla para el tamizaje oportunístico de DM en personas asintomáticas que por algún motivo acuden a un servicio de salud. Sin embargo, la prueba de oro para el tamizaje de diabetes en estudios poblacionales sigue siendo la medición de la glucemia 2 horas post carga de glucosa. Es muy importante tener en cuenta que una prueba de tamizaje solo indica una alta probabilidad de tener DM y debe ser confirmada con una prueba diagnóstica.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS:

ü Hemoglobina Glicosilada HbA1C: Estado de la glicemia del paciente de hace 3 meses.

ü Método ELISA

http://apuntesmedicos.net/2008/05/27/diagnostico-de-la-diabetes-mellitus-y-otros-problemas-metabolicos-asociados-a-regulacion-alterada-de-la-glucosa/

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-21252006000100012&script=sci_arttext